熒光定量PCR技術

簡介

實時熒光定量PCR 技術（Real-Time Quantitative PCR）是通過對PCR 擴增反應中每一個循環產物熒光信號的實時檢測從而實現對起始模板定量及定性分析。在實時熒光定量PCR 反應中，引入了一種熒光化學物質，隨著PCR 反應的進行，PCR 反應產物不斷累積，熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環，收集一個熒光強度信號，從而通過熒光強度變化監測產物量的變化。本公司主要提供目前使用較多的SYBR Green I 熒光染料法和Taqman 探針法。

相關技術的三個基本概念

基線（Baseline）

在PCR 擴增反應的最初幾個循環里，熒光信號變化不大，接近一條直線，即是基線。一般來講，第3-15 個循環的熒光值就是基線。

熒光閾值（Threshold）

閾值一般是基線的熒光信號標準差的10 倍，熒光閾值設定在PCR 擴增的指數期。

CT 值（Ct value）

Ct 值表示的是每個PCR 反應管內熒光信號到達設定的閾值時所經歷的循環數。

相同模板在同一臺PCR 儀上相同條件下重復96 次擴增的擴增曲線圖可以看出終點處檢測產物量不恒定，但是Ct 值則極具重現性。

研究表明，各模板的Ct 值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系，起始拷貝數越多，Ct 值就越小，反之亦然。利用已知起始拷貝數（絕對量）的的標準品可作出標準曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數（絕對量）的對數，縱坐標代表Ct 值。因此，只要獲得未知樣品Ct 值，即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數（絕對量）。

1. 技術流程

2. 結果展示

擴增曲線

標準曲線的擴增曲線

溶解曲線（SYBR Green I 法）

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標準曲線（絕對定量）

3. 可提供的服務

(1) 核酸提?。òɑ蚪MDNA、RNA、cDNA反轉錄）

(2) 引物設計及合成

(3) 制備標準品質粒

(4) 標準曲線

(5) qPCR擴增及熒光信號采集

4. 送樣要求

Total RNA/gDNA：50 ng/ul 以上，至少20ul，條帶無降解。需低溫運輸

細胞： 10⁷以上，需收集細胞沉淀，干冰運輸

細菌/酵母菌：10⁷以上，需收集菌體，完全去除培養液，立即放入液氮中，放-80℃冰箱凍存，干冰運輸

組織：300mg以上，需干冰運輸

血液：>1ml，需干冰運輸

葉片：>100mg，需干冰運輸

5. 公司提供的結果

(1) 原始數據（excel表）

(2) 實驗報告（包括擴增曲線、融解曲線（SYBR Green I 法）、原始數據、標準曲線（絕對定量）、相對定量結果的柱狀圖等相關信息）

熒光定量PCR項目電子訂單

6. 聯系我們

技術支持電話： 180 0102 7002

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